Objetivos Gerais:

1 - Os alunos deverão ser capazes de: Adquirir conhecimentos básicos sobre métodos laboratoriais de análise de ácidos nucleicos e proteínas
2 - Conhecer exemplos de aplicações das metodologias a problemas e casos de estudo concretos
3 - Desenvolver competências práticas na utilização de materiais e equipamentos de laboratório, incluindo a utilização de softwares de análise
4 - Planear e executar protocolos laboratoriais com autonomia
5 - Reconhecer os riscos e aplicar os procedimentos de segurança na prática laboratorial
6 - Desenvolver capacidades de trabalho em equipa e espírito crítico
7 - Desenvolver competências de análise, interpretação e comunicação de resultados
8 - Identificar as metodologias adequadas a diferentes estudos na área da Biologia
9 - Reconhecer as limitações e artefactos de cada metodologia

Conteúdos / Programa:

1 - Isolamento e purificação de DNA e RNA
2 - Quantificação e determinação da qualidade de DNA e RNA (espectrofotometria, ensaios Picogreen)
3 - Amplificação de ácidos nucleicos (PCR convencional, nested, multiplex e digital, MLPA, Real Time PCR, RT-qPCR)
4 - Ensaios de restrição enzimática (RFLPs)
5 - Electroforese de DNA (agarose, poliacrilamida, DGGE, capilar)
6 - Southern and Northern Blotting
7 - Sequenciação de DNA (Sanger e NGS)
8 - Microarrays de genotipagem e expressão génica
9 - Citogenética molecular (FISH, QF-PCR)
10 - Electroforese de proteínas (acetato de celulose, SDS-PAGE, pulse-field, focagem isoeléctrica,capilar)
11 - Western e Eastern Blotting
12 - Métodos enzimáticos (espectrofotometria, turbidimetria, electroquímica, ELISA)
13 - Imunoprecipitação (proteína-proteina Co-IP, proteína-DNA ChIP, proteína-RNA RIP/CLIP)
14 - Cromatografia (camada fina mono e bidimensional, troca iónica, filtração em gel, de afinidade, HPLC, gasosa)
15 - Espectrometria de massa (MALDI, MALDI-TOF, ESI)

Bibliografia / Fontes de Informação:

Cseke L.J., Kirakosyan A., Kaufman P.B., Westfall M.V. , 2011 , Handbook of Molecular and Cellular Methods in Biology and Medicine , CRC Press, Taylor & Francis Group
Green M.R., Sambrook J. , 2012 , Molecular Cloning: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory Press
Walker J.M., Rapley R. , 2008 , Molecular Biomethods Handbook , Humana Press

Métodos e Critérios de Avaliação:

Tipo de Classificação: Quantitativa (0-20)

Metodologia de Avaliação:
A UC compreende aulas T, TP, PL e S, distribuídas ao longo de 14 semanas lectivas e calendarizadas de forma a que possibilitem uma aprendizagem integrada. Nas aulas T o docente expõe os conteúdos programáticos com recurso a suporte audiovisual. As TP têm por base a resolução orientada de exercícios e a análise, discussão e interpretação de dados brutos, resultantes dos métodos moleculares abordados. As PL incluem trabalhos laboratoriais de grupo, com aplicação a casos de estudo concretos. Os S centram-se na discussão de artigos científicos selecionados, que ilustram aplicações das metodologias. A avaliação da UC baseia-se em: - 2 testes escritos, de integração de conteúdos T, TP e PL, nota mínima 8,0v (30% cada) - 2 relatórios de grupo PL (15% cada) - avaliação contínua nas TP e PL (participação, desempenho, domínio dos conceitos, pertinência das intervenções, raciocínio científico) (10%).